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非洲猪瘟血样检测设备厂家型号价格
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实验室仪器设备一站式采购平台来宝商城为您提供食品厂、饲料厂、生猪屠宰场等非洲猪瘟血样检测设备厂家型号价格及产品使用指导,欢迎联系我们详询。附赠猪瘟检测实验具体步骤供大家参考。
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非洲猪瘟血样检测设备厂家型号价格

非洲猪瘟检测实验室建设方案

用于非洲猪瘟病毒检测的实验室,推荐配置以下设备:II级生物安全柜、高速离心机、低温冰箱、高压蒸汽灭菌器、恒温水浴锅、组织匀浆仪、移液器、PCR仪、迷你型离心机。同时,建议实验室配备合适的个人防护用品,如防护服、手套、口罩等。

非洲猪瘟检测实验步骤:
1.样品处理
血液样品直接用;
淋巴结、脾脏、扁桃体样品,用无菌的剪刀和镊子剪取待检样品2.0 g于研钵中充分研磨,再加10.0 mL PBS(pH 7.2,含1万单位青霉素和1万单位链霉素)混匀(样品不足2.0 g按1:5比例加PBS),对处理的待检样品置70℃,30 min灭活后,3 000 r/min,4 ℃离心5 min,取上清液,编号备用;血球粉处理同上,只不过省掉研磨步骤。

2.猪瘟检测样品存放
采集或处理好的样品在2℃~8℃条件下保存应不超过24 h;若需长期保存,须放置-80 ℃冰箱,但应避免反复冻融(冻融不超过3次)。
3.操作步骤
3.1 病毒DNA的提。ㄊ褂肁盒)
(1)待检样品、阳性对照和阴性对照的份数总和用n表示,取n个灭菌的1.5 mL离心管,逐管编号。
(2)每管加入Buffer A 500 L。
(3)每管分别加入已处理的待检样品、阳性对照、阴性对照各200 L,充分混匀,室温放置10分钟。
(4)取与上述离心管等量的DNase-Free吸附柱和收集管,编号。将离心管中的溶液转移至DNase-Free吸附柱,(为避免堵塞吸附柱,尽量不要吸悬浮杂质)。
(5)13000 r/min室温离心30 sec。
(6)弃去收集管液体,将吸附柱放回收集管中。
(7)吸附柱内加入600 μL Buffer B,13000 r/min离心30 sec。
(8)弃去收集管液体,将吸附柱放回收集管中。
(9)重复步骤(7),(8)。
(10)13000 r/min空柱离心2 min,去除残留液。
(11)将每个吸附柱分别移入新的1.5mL离心管中,向柱中央加入50 μL Buffer C,室温静置1 min,13000 r/min离心30 sec,离心管中液体即为模板DNA。获得的DNA溶液,冰上保存备用(注意提取的DNA须在2 h内进行PCR 扩增,若需长期保存须放置-80 ℃冰箱,但应避免反复冻融)。
3.2 非洲猪瘟检测用荧光PCR扩增(使用B盒)
(1)从试剂盒中取出荧光PCR反应液、Taq酶,室温融化后,2 000 r/min离心5 sec。设所需PCR管数为n(n = 样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系需要20 μL 荧光PCR反应液和0.5 μL Taq酶。计算好各试剂的使用量,加入一适当体积小管中,充分混合均匀后,向每个PCR管中各分装20 μL。
(2)分别向上述PCR管中加入1.3.1(11)中制备的DNA溶液各5μL,盖紧管盖,500 r/min 离心30 sec。
(3)将加样后的PCR管放入荧光PCR检测仪内,作好标记。反应参数设置:
第一阶段,预变性95℃/3 min;第二阶段,95℃/15 sec,52℃/10 sec,60℃/35 sec共45个循环。荧光收集在第二阶段每次循环的60℃延伸时进行。

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